W celu ilościowego oraz jakościowego oznaczenia α-aminokwasów w próbce stosuje się trójetapowy proces analityczny:
Etap I: rozdział na kolumnie chromatograficznej, podczas którego wykorzystuje się różnice w czasie przepływu (t, minuty) aminokwasów przez kolumnę. Czas przebywania w kolumnie danego aminokwasu ma stałą i powtarzalną wartość.
Etap II: reakcja α-aminokwasu z ninhydryną, w wyniku której pojawia się tzw. purpura Ruhenmana – związek chemiczny o fioletowym zabarwieniu:
Etap III: spektrometryczny pomiar wartości absorbancji (A), która jest proporcjonalna do stężenia molowego purpury Ruhenmana. Im wyższe jest stężenie molowe α-aminokwasu, tym większa jest intensywność fioletowej barwy roztworu, a w konsekwencji – wartość absorbancji.
Na podstawie: M. Gumińska, Zarys biochemii ogólnej dla studentów farmacji i analityki medycznej, Kraków 1998 oraz J. McMurry, Chemia organiczna, Warszawa 2012.
Podaj liczbę wiązań σ oraz liczbę wiązań π, jakie znajdują się w cząsteczce Ninhydryny oraz określ stopień utlenienia atomu węgla w cząsteczce purpury Ruhenmana, któremu przypisuje się hybrydyzację typu sp3 jego walencyjnych orbitali zhybrydyzowanych.
© dr inż. Rafał Szczypiński, wszelkie prawa zastrzeżone